根据GB/T 18281.1-2024 《医疗保健产品灭菌 生物指示物 第1部分：通则》生物指示剂的培养时间一般为7天。但是在接收成品生物指示剂时，你可能会发现说明书上标示的生物指示剂培养时间是7天、48h、24h，甚至是更短的3h、30min，这些小于要求的培养时间是怎么确定的呢？
缩短生物指示剂培养时间需依据ISO 11138-8：2021《Sterilization of health care products — Biological indicators —Part 8: Method for validation of a reduced incubation time for a biological indicator》开展实验，根据实验结果确认最短的培养时间。该标准的等同替代国家标准为GB/T 18281.8 - 2024《医疗保健产品灭菌 生物指示物 第8部分：缩短生物指示物培养时间的确认方法》，于2024年11月发布，将于2026年06月正式实施。
以泰林SS6-121型自含式压力蒸汽灭菌生物指示剂的缩短培养时间测试结果为例，我们详细介绍如何确认生物指示剂的缩短培养时间。
确认生物指示剂在部分周期灭菌的条件，使生物指示剂在此周期中灭菌，培养7天后预期有30%～95%呈现阳性。
将待测批次生物指示剂在抗力仪中121℃灭菌16min，培养7天后，生物指示剂的阳性率为70%，认为该灭菌时间符合预期要求；假如在相同条件下，生物指示剂培养7天后的阳性率低于30%或高于95%，则认为该灭菌时间不符合预期，需要调整灭菌时间，使灭菌后生物指示剂的阳性率在30%～95%之间；表1介绍了该款生物指示剂灭菌时间的筛选过程，三批次生物指示剂在灭菌时间为16min时，阳性率在40%～65%之间，均符合要求。可以确认后续的灭菌条件为：121℃，16min。
取3批次该产品，每批次100支生物指示剂，按照步骤（01）中确认的灭菌时间进行杀灭，即抗力仪中121℃灭菌16min。
杀灭结束后，按说明书要求进行接种操作，并转移至规定的培养条件下培养7天。按照预先确定的时间间隔，记录生物指示剂的阳性结果和阴性结果。例如，设定的时间间隔为24h，每隔24h进行结果记录，最终的培养时间结果以“h”为单位。测试结果见表2。
在相同的培养时间间隔下，3批次生物指示物阳性的数量与第7d的阳性生物指示物数量之间的相关度≥97%，即表2中“生长比例”≥97%，可以确认为最短的培养时间。计算公式如下：
可知，第一次批次和第二批次指示剂在培养24h时，生长比例均＜97%，无法以“24h”作为最短培养时间；当培养时间为48h时，三批次生物指示剂的生长比例均为100%，满足标准中“≥97%”的要求，可以选择48h作为该生物指示剂的最终培养时间。因此，泰林SS6-121型自含式压力蒸汽灭菌生物指示剂的说明书标示的培养时间为48h。
目前，该方法在医疗器械、医院等应用广泛，如快速生物指示剂（培养时间一般为3h）、极速生物指示剂（培养时间一般为30min），这些生物指示剂呈阳性的确认主要通过检测生物指示剂的荧光强度。2023版《药品GMP指南》中明确指出，ISO 11138-8：2021《Sterilization of health care products — Biological indicators —Part 8: Method for validation of a reduced incubation time for a biological indicator》中描述了缩短培养时间的方法，只适用于特定行业（如医院或者医疗保健机构）下和某些生物指示剂，并不适用于制药行业。
ISO 11138-8规定的缩短生物指示剂培养时间的确认方法，确认灭菌时间后至少需要3批次生物指示剂，各100支，通过持续观察灭菌后生物指示剂阴性、阳性的数量，以确认最短的培养时间。
那么，现在你理解缩短生物指示剂培养时间是如何确认的了吗？